WISP-1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423705-ACT

Wisp1 codifica WISP-1 (WNT1-inducible signaling pathway protein 1), un fattore matricellulare secreto della famiglia CCN che integra i segnali provenienti dalla matrice extracellulare con la segnalazione di fattori di crescita e della via Wnt. Nei tessuti murini, WISP-1 modula adesione, migrazione, proliferazione e sopravvivenza cellulare influenzando vie associate all’attività della β-catenina, alla segnalazione mediata dalle integrine e al rimodellamento del microambiente stromale. La sua espressione è comunemente associata a programmi fibrogenici, alla differenziazione osteogenica e condrogenica e a risposte simili alla riparazione delle ferite che modellano l’architettura dei tessuti. La segnalazione di WISP-1, quando deregolata, è stata studiata in contesti di fibrosi patologica, rimodellamento associato all’infiammazione e interazioni tumore–stroma rilevanti per la biologia del cancro e la ricerca sulle metastasi.

WISP-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Wisp1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

WISP-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Wisp1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Wisp1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di WISP-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Wisp1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da WISP-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via WISP-1 nelle cellule tumorali con espressione di Wisp1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.