WAVE1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401913-ACT

WASF1 codifica a WAVE1, um componente central do complexo regulador WAVE que conecta a sinalização de Rac1 à nucleação de actina mediada por Arp2/3 e à montagem de filamentos ramificados. A WAVE1 coordena a formação de lamelipódios, o “ruffling” de membrana e o crescimento de neuritos, sustentando a migração celular e a arquitetura sináptica por meio de uma remodelação dinâmica do citoesqueleto. Essa via interage com redes de PI3K/Rho GTPases e com a sinalização de adesão para moldar a polaridade celular e o tráfego intracelular. A desregulação do controle de actina associado à WAVE1 tem sido implicada em fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, e a sinalização citoesquelética alterada também é estudada em contextos de comportamento invasivo e biologia celular de metástases.

WAVE1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WASF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WAVE1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WASF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WASF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WAVE1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WASF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WAVE1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WAVE1 em células tumorais com expressão de WASF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.