Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
VPS33B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-433270
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- VPS33B El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico VPS33B, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: VPS33B Anticuerpo (G-9): sc-398322
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
VPS33B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-433270 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Vps33b codifica VPS33B, una proteína de la familia Sec1/Munc18 que actúa como componente central de la maquinaria de anclaje y fusión que regula el tráfico endosomal-lisosomal. VPS33B coopera con la red VPS16/18/33/41 (relacionada con HOPS/CORVET) y con el complejo VPS33B–VIPAR para favorecer el acoplamiento de vesículas, la fusión de membranas y el mantenimiento de la polaridad epitelial. En células de ratón, la actividad de VPS33B contribuye a la clasificación de carga, la biogénesis de orgánulos relacionados con lisosomas y la secreción regulada, vinculándola con vías más amplias que controlan la homeostasis de membranas y el transporte intracelular. La alteración del tráfico dependiente de VPS33B se ha asociado con defectos en el transporte polarizado y en la formación de gránulos plaquetarios, lo que aporta un marco mecanístico para estudiar patologías que implican disfunción epitelial y hematopoyética.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO VPS33B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Vps33b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Vps33b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Vps33b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VPS33B.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Vps33b para la investigación de la señalización de VPS33B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Vps33b críticos para la función de VPS33B
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Vps33b para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido VPS33B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido VPS33B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Vps33b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VPS33B (m) y el plásmido HDR VPS33B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Vps33b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Vps33b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.