Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Vimentin Double Nickaseプラスミド (m): sc-423676-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Vimentin Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Vimentinダブルニカースプラスミド（m）およびVimentinダブルニカースプラスミド（m2）は、Vimを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Vimentin 抗体 (E-5): sc-373717
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Vimentin Double Nickaseプラスミド (m) | sc-423676-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Vimentin Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-423676-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Vimは、細胞骨格ネットワークを組織化し、間葉系および運動性をもつ細胞状態において細胞形態、機械的完全性、ならびにオルガネラの配置の維持に寄与するIII型中間径フィラメントタンパク質であるビメンチンをコードする。ビメンチンは細胞分裂、遊走、接着の過程で動的に再構築され、アクチンや微小管と相互作用しつつ、上皮間葉転換（EMT）、創傷修復、炎症応答に関わるシグナル伝達経路を統合する。マウスモデルでは、ビメンチンの発現量やフィラメント構造の変化が、免疫細胞のトラフィッキング、線維化に伴うリモデリング、転移関連の表現型の変化と関連づけられており、Vimは細胞骨格とシグナル伝達のクロストークを研究するうえで有用な結節点となる。さらに、間質系および免疫系コンパートメントに広く発現することから、組織構築や微小環境による制御の解明にも適している。
Vimentin ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Vim 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Vim内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Vimの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Vimが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。