Villin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400587

Descripción general

VIL1 codifica la villina, una proteína de unión a actina específica de epitelios, enriquecida en el borde en cepillo de los enterocitos intestinales y de las células del túbulo proximal renal, donde agrupa, “capa” y secciona la F‑actina para dar forma a la arquitectura de las microvellosidades. Mediante el remodelado de actina regulado por Ca2+ y fosfoinosítidos, la villina favorece la polaridad epitelial, el tráfico de membranas en la superficie apical y la función de barrera durante la diferenciación y la regeneración. VIL1 se utiliza ampliamente como marcador del linaje de enterocitos y de la maduración epitelial, y se ha descrito una expresión o localización alteradas de villina en contextos de lesión gastrointestinal e inflamación, así como en la biología de tumores epiteliales. Estas propiedades convierten a VIL1 en un elemento práctico para estudiar la dinámica del citoesqueleto, la morfogénesis epitelial y el mantenimiento de las microvellosidades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Villin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen VIL1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del VIL1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de VIL1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Villin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en VIL1 para la investigación de la señalización de Villin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de VIL1 críticos para la función de Villin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de VIL1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Villin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Villin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus VIL1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Villin (h) y el plásmido HDR Villin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología VIL1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana VIL1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.