Plasmide CRISPR d'Activation (h) Villin: sc-400587-ACT

VIL1 code la villine, une protéine de liaison à l’actine et de sectionnement des filaments d’actine, enrichie dans les microvillosités des épithéliums intestinal et rénal, où elle contribue à l’établissement et au remodelage de la bordure en brosse apicale. La villine régule l’organisation du cytosquelette, la polarité épithéliale et la motilité cellulaire grâce à un contrôle, dépendant du Ca²⁺, du faisceautage et du sectionnement de la F‑actine, reliant ainsi la dynamique membranaire aux programmes de différenciation des épithéliums absorbants. En tant que marqueur canonique de la lignée des entérocytes, les altérations de l’expression de VIL1 sont fréquemment utilisées pour suivre les changements d’état de l’épithélium lors de l’inflammation, des réponses aux lésions et de la transformation oncogénique. Ces propriétés font de la villine un point d’entrée utile pour étudier l’architecture des microvillosités, la biologie de la barrière et la signalisation dépendante du cytosquelette dans des modèles épithéliaux humains.

Villin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de VIL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Villin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus VIL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription VIL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Villin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus VIL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Villin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Villin dans les cellules tumorales présentant une expression de VIL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.