VEGF-C Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400553-ACT

VEGFC codifica il fattore di crescita endoteliale vascolare C (VEGF‑C), un ligando secreto che segnala principalmente attraverso VEGFR‑3 (FLT4) e che, dopo processamento proteolitico, può anche legarsi a VEGFR‑2 (KDR). VEGF‑C attiva PI3K–AKT, MAPK/ERK e vie di segnalazione correlate delle tirosin-chinasi recettoriali per regolare la linfangiogenesi, la migrazione delle cellule endoteliali e la permeabilità vascolare. Questi processi sono centrali per l’omeostasi dei fluidi tissutali e per il traffico delle cellule immunitarie all’interno delle reti linfatiche. Un’espressione o una segnalazione di VEGFC deregolata è spesso oggetto di studio in contesti di rimodellamento linfatico associato ai tumori, infiammazione e fisiopatologia legata all’edema.

VEGF-C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di VEGFC senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

VEGF-C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus VEGFC nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione VEGFC, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di VEGF-C. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus VEGFC nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da VEGF-C nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via VEGF-C nelle cellule tumorali con espressione di VEGFC silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.