VDAC2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423662

Panoramica

Vdac2 codifica il canale anionico voltaggio-dipendente 2 (VDAC2), una porina principale della membrana mitocondriale esterna che regola il flusso di metaboliti e ioni tra il citosol e i mitocondri. VDAC2 partecipa alla respirazione mitocondriale, all’omeostasi redox e alla segnalazione dipendente da Ca²⁺ influenzando lo scambio ATP/ADP e l’accoppiamento con i processi di trasporto della membrana interna. Modula inoltre l’apoptosi intrinseca controllando la permeabilizzazione della membrana mitocondriale esterna e le interazioni con le proteine della famiglia BCL-2, collegando il metabolismo mitocondriale alle decisioni sul destino cellulare. La disregolazione delle vie associate a VDAC2 è stata implicata in alterazioni della bioenergetica e delle risposte allo stress, rilevanti per la neurodegenerazione, i meccanismi delle malattie cardiometaboliche e i fenotipi di sopravvivenza delle cellule tumorali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VDAC2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Vdac2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Vdac2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Vdac2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VDAC2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Vdac2 per lo studio della segnalazione di VDAC2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Vdac2 critici per la funzione di VDAC2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Vdac2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VDAC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal VDAC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Vdac2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VDAC2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR VDAC2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Vdac2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Vdac2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.