Plásmido CRISPR de Activación (h) Vasorin: sc-404942-ACT

El VASN humano codifica vasorina, una glucoproteína transmembrana de tipo I enriquecida en células de músculo liso vascular que modula la señalización célula–célula en la membrana plasmática. La vasorina puede unirse y secuestrar ligandos de la familia TGF-β, influyendo así en programas transcripcionales dependientes de SMAD que regulan la remodelación de la matriz extracelular, el cambio fenotípico y la migración. A través de estas actividades, VASN se estudia en el contexto del desarrollo vascular y las respuestas a la lesión, así como en procesos de remodelación desregulada vinculados a la fibrosis y a la señalización del estroma asociada al cáncer. Se ha informado de una expresión alterada de vasorina en múltiples contextos de enfermedad en los que el tono de la vía de TGF-β y el desprendimiento (shedding) de proteínas de superficie celular están perturbados.

Vasorin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de VASN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Vasorin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus VASN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional VASN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Vasorin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo VASN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Vasorin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Vasorin en células tumorales con expresión de VASN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.