VAP-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401777

Panoramica

AOC3 codifica la vascular adhesion protein-1 (VAP-1), una molecola di superficie delle cellule endoteliali e della muscolatura liscia che funge sia da recettore di adesione per i leucociti sia da ammina ossidasi semicarbazide-sensibile (SSAO) rame-dipendente. Attraverso la deaminazione ossidativa delle ammine primarie, VAP-1 genera aldeidi, ammoniaca e perossido di idrogeno, collegando la biologia redox vascolare alla regolazione del traffico delle cellule immunitarie attraverso l’endotelio. L’attività di VAP-1 interseca la segnalazione infiammatoria, le dinamiche di adesione cellula–cellula e il rimodellamento della matrice extracellulare nel microambiente vascolare. Un’espressione o un’attività enzimatica deregolata di AOC3/VAP-1 è stata associata a stati infiammatori cronici e alla patobiologia vascolare, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico negli studi sull’attivazione endoteliale e sulla extravasazione leucocitaria.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VAP-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AOC3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AOC3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AOC3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VAP-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AOC3 per lo studio della segnalazione di VAP-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni AOC3 critici per la funzione di VAP-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AOC3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VAP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal VAP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AOC3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VAP-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR VAP-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AOC3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AOC3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.