Vangl2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-430058-ACT

Vangl2 (Van Gogh-like 2) codifica um componente central da via de polaridade celular planar (PCP), que coordena comportamentos celulares polarizados em tecidos durante o desenvolvimento do camundongo. Como uma proteína de membrana com quatro passagens, Vangl2 ajuda a organizar complexos PCP assimétricos com parceiros como Frizzled/Dishevelled e Prickle, influenciando a extensão convergente, a divisão celular orientada e a migração coletiva. A sinalização dependente de Vangl2 intersecta vias não canônicas de Wnt para regular a dinâmica do citoesqueleto e a morfogênese tecidual. A desregulação da função de Vangl2 está associada a defeitos de PCP e a fenótipos do desenvolvimento, incluindo anomalias no fechamento do tubo neural, tornando-o um alvo útil para dissecar processos guiados por polaridade.

Vangl2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Vangl2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Vangl2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Vangl2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Vangl2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Vangl2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Vangl2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Vangl2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Vangl2 em células tumorais com expressão de Vangl2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.