UVSSA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408933

Panoramica

UVSSA (UV-stimulated scaffold protein A) è un fattore chiave della riparazione per escissione di nucleotidi accoppiata alla trascrizione (TC-NER), in cui contribuisce a ripristinare la trascrizione dopo l’arresto della RNA polimerasi II su lesioni del DNA indotte dai raggi UV. La proteina umana UVSSA coopera con CSA/ERCC8 e CSB/ERCC6 e favorisce il reclutamento e la stabilizzazione della deubiquitinasi USP7, sostenendo una dinamica di ubiquitinazione regolata durante l’assemblaggio del complesso di riparazione. Attraverso queste attività, UVSSA contribuisce all’integrità del genoma, al recupero della trascrizione in seguito a stress genotossico e alle risposte cellulari all’irradiazione UV. Difetti nella TC-NER mediata da UVSSA sono associati a sensibilità ai raggi UV e a disturbi dello spettro della sindrome di Cockayne, rendendo UVSSA rilevante per lo studio delle disfunzioni delle vie di riparazione del DNA e del fallimento trascrizionale indotto da stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UVSSA (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene UVSSA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del UVSSA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto UVSSA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UVSSA.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di UVSSA per lo studio della segnalazione di UVSSA, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni UVSSA critici per la funzione di UVSSA
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di UVSSA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UVSSA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal UVSSA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus UVSSA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UVSSA Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR UVSSA (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia UVSSA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio UVSSA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.