USP34 Lentiviral Activation Particles (m): sc-421760-LAC

Usp34 kodiert das deubiquitinierende Enzym USP34, eine ubiquitinspezifische Protease, die Polyubiquitin-Ketten modifiziert, um Proteinstabilität und die Stärke von Signalwegen zu steuern. USP34 wurde mit der Regulation zentraler Signalwege, darunter der Wnt/β-Catenin-Signalweg, sowie weiterer ubiquitinabhängiger Prozesse in Verbindung gebracht, die Transkriptionsprogramme, Zellzyklusprogression und zelluläre Stressantworten beeinflussen. Über seine Effekte auf Proteostase und Signaltransduktion wird eine veränderte USP34-Aktivität in Zusammenhängen von Entwicklungsphänotypen und krankheitsassoziierter Fehlregulation von Wachstums- und Differenzierungswegen untersucht. Das Mausprotein USP34 bietet ein genetisch gut handhabbares System, um konservierte Deubiquitinierungsmechanismen in der normalen Physiologie und in krankheitsrelevanten zellulären Zuständen zu untersuchen.

USP34 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Usp34-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

USP34 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Usp34-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen USP34-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Usp34-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.