Plasmide CRISPR d'Activation (h) USP1: sc-406837-ACT

USP1 (ubiquitin specific peptidase 1) est une enzyme de déubiquitination qui régule le maintien du génome en retirant l’ubiquitine de substrats clés impliqués dans les réponses aux dommages de l’ADN. Elle est surtout connue pour contrôler la voie de l’anémie de Fanconi via la déubiquitination de FANCD2/FANCI et pour moduler la synthèse translésionnelle en déubiquitinant PCNA, influençant ainsi la stabilité de la fourche de réplication et le choix des voies de réparation. Par ces activités, USP1 affecte la progression du cycle cellulaire, la tolérance au stress de réplication et l’équilibre entre le contournement des lésions fautif et sans erreur. Une expression ou une activité dérégulée d’USP1 a été associée à une capacité de réparation de l’ADN altérée et à des phénotypes d’instabilité génomique pertinents pour la biologie du cancer et d’autres troubles du maintien du génome.

USP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de USP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

USP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus USP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription USP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de USP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus USP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de USP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie USP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de USP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.