UNC45A Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-430401-LAC

Unc45a codifica UNC45A, uno chaperone della miosina con dominio UCS che coopera con HSP90 per promuovere il corretto ripiegamento, la stabilizzazione e il ciclo funzionale delle miosine non muscolari. Attraverso la regolazione della dinamica actomiosinica, UNC45A sostiene l’organizzazione del citoscheletro, il traffico vescicolare e la migrazione cellulare, collegandosi a processi quali la citocinesi e la polarità epiteliale. Un’alterata attività di UNC45A può perturbare la proteostasi e le vie di segnalazione dipendenti dalla contrattilità, con effetti a valle sull’omeostasi tissutale e sulle risposte allo stress. Queste funzioni rendono l’UNC45A del topo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici su fenotipi associati al citoscheletro e su reti geniche che influenzano il comportamento proliferativo e migratorio.

Le particelle di attivazione lentivirale UNC45A (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Unc45a in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale UNC45A (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Unc45a, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di UNC45A. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Unc45a e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.