ULK1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400516-ACT

ULK1（UNC-51様オートファジー活性化キナーゼ1）は、栄養状態やエネルギー状態のシグナルを統合してマクロオートファジーを開始するセリン／スレオニンキナーゼである。ULK1複合体の中核として機能し、mTORC1の阻害およびAMPKの活性化に応答して、ファゴフォア形成を促進するとともに、下流のオートファジー機構を統括する。オートファジーフラックスの調節を通じて、ULK1はミトコンドリア恒常性、プロテオスタシス、ならびに代謝ストレスに対する細胞の適応に影響を与える。ULK1シグナル伝達やオートファジー制御の破綻は、神経変性、感染生物学、がん細胞のストレス応答などの文脈で関与が示唆されており、分解（カタボリック）能の変化が生存経路を再構築し得る。

ULK1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ULK1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ULK1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ULK1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はULK1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ULK1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のULK1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるULK1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびULK1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるULK1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。