UGT1A5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402838-ACT

UGT1A5は、第II相代謝におけるグルクロン酸抱合反応を触媒するUDP-グルクロン酸転移酵素をコードしており、多様な内因性化合物および外来性（異物）化合物の溶解性を高め、体内からのクリアランス（排泄）を促進します。UGT1A遺伝子座の一部として、UGT1A5は肝臓および肝外組織の代謝、酸化還元（レドックス）バランス、化学ストレス応答と連動する細胞内解毒ネットワークに寄与します。UGT1Aファミリー活性の変動は、薬物動態、代謝恒常性、ならびに環境曝露による毒性への感受性に与える影響という観点から広く研究されています。グルクロン酸抱合能の破綻は、肝機能障害のモデルや、抱合の変化がシグナル関連代謝物や異物処理に影響し得るがん生物学においても重要です。

UGT1A5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UGT1A5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UGT1A5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UGT1A5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUGT1A5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UGT1A5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUGT1A5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUGT1A5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUGT1A5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUGT1A5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。