twist Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400108-LAC

TWIST1 codifica Twist, un fattore di trascrizione di base helix-loop-helix che regola la specificazione della linea mesenchimale, la morfogenesi e i programmi di transizione epitelio-mesenchimale. Twist integra le reti trascrizionali dello sviluppo con vie di segnalazione come TGF-β, WNT/β-catenina e PI3K/AKT per modulare le decisioni sul destino cellulare, la sopravvivenza e l’espressione genica associata alla motilità. Un’espressione deregolata di TWIST1 è collegata a stati di differenziazione alterati, invasività e fenotipi “stem-like” in molteplici contesti oncologici, e la sua alterazione a livello germinale è associata a disturbi dello sviluppo craniofacciale, tra cui la sindrome di Saethre–Chotzen. Queste caratteristiche rendono TWIST1 un nodo chiave per studiare il controllo trascrizionale della plasticità, il cambio di linea differenziativa (lineage switching) e le risposte al microambiente nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale twist (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TWIST1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale twist (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TWIST1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di twist. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TWIST1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.