TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407927

Panoramica

TTF1 (transcription termination factor 1; noto anche come TTFC) è una proteina nucleolare che si lega al DNA e regola la terminazione della trascrizione da parte della RNA polimerasi I, contribuendo inoltre all’organizzazione della cromatina rDNA e all’architettura del nucleolo. Legandosi a specifici elementi terminatori all’interno delle ripetizioni di DNA ribosomiale, TTF1 aiuta a coordinare la sintesi di rRNA con gli eventi di replicazione e riparazione al locus rDNA, influenzando la biogenesi dei ribosomi e la proteostasi. Un controllo alterato della trascrizione di Pol I e della funzione nucleolare è un segno distintivo dello stress proliferativo ed è spesso studiato nel contesto della segnalazione oncogenica, dell’instabilità genomica e della senescenza cellulare. Di conseguenza, TTF1 viene comunemente analizzato in vie che collegano l’omeostasi nucleolare, la regolazione trascrizionale e le risposte dei checkpoint del ciclo cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TTF1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TTF1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TTF1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TTF/Transcription Termination Factor/TTF1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TTF1 per lo studio della segnalazione di TTF/Transcription Termination Factor/TTF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TTF1 critici per la funzione di TTF/Transcription Termination Factor/TTF1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TTF1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TTF1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TTF1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TTF1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.