Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TRPC1 Plasmide Double Nickase (m): sc-423512-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRPC1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TRPC1 Double Nickase Plasmid (m) e il TRPC1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Trpc1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TRPC1 Antibody (E-6): sc-133076
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRPC1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-423512-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRPC1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-423512-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Trpc1 codifica TRPC1, una subunità di canale cationico non selettivo che contribuisce all’ingresso di Ca2+ attivato dai recettori e all’ingresso di Ca2+ dipendente dallo svuotamento dei depositi intracellulari (store-operated) in molti tipi cellulari del topo. Modellando le dinamiche intracellulari del Ca2+, TRPC1 modula processi quali l’eccitabilità di membrana, il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione cellulare e programmi trascrizionali a valle dei recettori accoppiati a PLC e della segnalazione STIM–ORAI. L’attività di TRPC1 si intreccia con vie dipendenti da MAPK e NFAT, influenzando la differenziazione cellulare e le risposte allo stress. Un’omeostasi del Ca2+ mediata da TRPC1 alterata è stata implicata in modelli sperimentali di rimodellamento cardiovascolare, neuroinfiammazione e segnalazione fibrotica, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici delle vie associate alle malattie.
TRPC1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Trpc1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Trpc1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Trpc1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Trpc1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.