Troponin C slow skeletal CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423431

Übersicht

Tnnc1 kodiert Troponin C der langsamen Skelettmuskulatur, eine Ca2+-bindende regulatorische Untereinheit des Troponin-Komplexes, der zytosolische Calciumtransienten mit dem Aktin-Myosin-Querbrückenzyklus in quergestreifter Muskulatur koppelt. Durch Ca2+-abhängige Konformationsänderungen moduliert TNNC1 die Positionierung von Tropomyosin auf den dünnen Filamenten und stimmt Kontraktionskinetik, Relaxation und Energieeffizienz in langsam zuckenden Fasern und im Herzen ab. Diese calcium-sensorische Funktion ist in die Erregungs-Kontraktions-Kopplung und Signalwege der Sarkomerorganisation integriert und verknüpft damit die intrazelluläre Ca2+-Handhabung mit der Reaktionsfähigkeit der Myofilamente. Eine Fehlregulation von TNNC1 und der Ca2+-Empfindlichkeit der dünnen Filamente wird mit erblichen Kardiomyopathien und kontraktiler Dysfunktion in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz in Studien zur Sarkomerbiologie und zu Mechanismen von Muskelerkrankungen unterstützt.

Das Troponin C slow skeletal CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tnnc1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tnnc1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tnnc1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Troponin C slow skeletal-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tnnc1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Troponin C slow skeletal-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tnnc1-Exone abzielen, die für die Troponin C slow skeletal-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tnnc1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Troponin C slow skeletal CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Troponin C slow skeletal CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tnnc1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Troponin C slow skeletal HDR-Plasmid (m) und Troponin C slow skeletal HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tnnc1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tnnc1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.