Plasmide Double Nickase (h) Tropomyosin β: sc-401580-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Tropomyosin β correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Tropomyosin β Double Nickase (h) et le plasmide Tropomyosin β Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TPM2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Tropomyosin β Antibody (3C8): sc-293374
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Tropomyosin β | sc-401580-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Tropomyosin β | sc-401580-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TPM2 code la tropomyosine β humaine, une protéine de liaison à l’actine en coiled-coil qui polymérise le long de l’actine filamentaire afin de stabiliser les microfilaments et de moduler l’accès des moteurs de myosine, façonnant ainsi la contractilité et la dynamique du cytosquelette. En régulant les interactions actine–myosine, TPM2 contribue à l’organisation du sarcomère dans le muscle et influence des processus tels que la morphologie cellulaire, la migration et la mécanotransduction via le cytosquelette d’actine. Une altération de la fonction ou de l’expression de TPM2 a été associée à des myopathies héréditaires et à des phénotypes de contracture, reflétant le rôle de la protéine dans le maintien d’une régulation adéquate des filaments fins. En tant que régulateur du cytosquelette, TPM2 est fréquemment étudiée dans des voies reliant l’assemblage des filaments d’actine, la génération de force et la signalisation dépendante du cytosquelette.
Tropomyosin β Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TPM2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TPM2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TPM2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TPM2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.