TROP-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402046-ACT

TACSTD2 codifica o antígeno de superfície celular do trofoblasto humano TROP-2, uma glicoproteína transmembranar do tipo I que atua em interações célula–célula e na sinalização epitelial. O TROP-2 modula a sinalização intracelular de Ca²⁺ e se acopla a vias de proliferação e sobrevivência, incluindo MAPK/ERK e PI3K/AKT, influenciando programas de adesão, migração e diferenciação. A expressão desregulada de TACSTD2 é frequentemente observada em neoplasias epiteliais e está associada a alterações no comportamento invasivo e na heterogeneidade tumoral, tornando-o um marcador útil em estudos de biologia epitelial. Além disso, variantes de perda de função em TACSTD2 estão ligadas a defeitos do epitélio corneano, apoiando seu papel na integridade tecidual e na manutenção da barreira.

TROP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TACSTD2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TROP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TACSTD2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TACSTD2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TROP-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TACSTD2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TROP-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TROP-2 em células tumorais com expressão de TACSTD2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.