Particules Lentivirales d'Activation (m) TRIM8: sc-429995-LAC

Trim8 code TRIM8, une ligase E3 d’ubiquitine de la famille TRIM qui régule la stabilité des protéines et l’intensité des signaux via l’ubiquitination, influençant des programmes transcriptionnels liés à l’immunité innée et aux réponses au stress cellulaire. TRIM8 module des voies induites par les cytokines, notamment NF-κB et la signalisation associée aux interférons, et a été impliquée, selon le contexte, dans le contrôle de l’activité et du renouvellement de régulateurs clés tels que p53 et les protéines STAT. Dans les modèles murins, TRIM8 est étudiée pour ses rôles dans le neurodéveloppement, l’inflammation et l’homéostasie cellulaire, où une expression altérée peut remodeler les réseaux de signalisation immunitaire et de contrôle de la croissance. Ces propriétés font de Trim8 un nœud utile pour disséquer la régulation, dépendante de l’ubiquitine, des circuits de signalisation dans des modèles pertinents pour l’étude des maladies.

Les particules d'activation lentivirales TRIM8 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Trim8 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TRIM8 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Trim8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TRIM8. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Trim8 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.