TRIM16 Plasmide Double Nickase (h): sc-409792-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRIM16 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TRIM16 Double Nickase Plasmid (h) e il TRIM16 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TRIM16. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TRIM16 Antibody (B-6): sc-398851
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRIM16 Plasmide Double Nickase (h) | sc-409792-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRIM16 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-409792-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRIM16 codifica una proteina della famiglia dei motivi tripartiti (TRIM) che funziona come ligasi E3 dell’ubiquitina e come fattore di impalcatura, coordinando il turnover proteico, la dinamica del citoscheletro e la segnalazione responsiva allo stress. TRIM16 è stata collegata alla regolazione dell’organizzazione dei filamenti intermedi, della proteostasi e alla modulazione di programmi trascrizionali che influenzano la differenziazione e la motilità cellulare. Attraverso meccanismi dipendenti dall’ubiquitina e interazioni proteina–proteina, TRIM16 può influenzare vie che governano le risposte immunitarie innate, l’adattamento allo stress ossidativo e il controllo della crescita. Un’alterata espressione o attività di TRIM16 è stata associata alla biologia tumorale e a fenotipi infiammatori, rendendola un bersaglio utile per studi meccanicistici delle reti di segnalazione e dell’omeostasi cellulare.
TRIM16 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TRIM16 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TRIM16. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TRIM16. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TRIM16 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.