Triadin CRISPR Activationプラスミド (m): sc-429407-ACT

マウスのTrdnは、横紋筋における興奮収縮連関を組織化する接合部筋小胞体（junctional SR）膜タンパク質であるトリアジン（triadin）をコードしており、リアノジン受容体（RyR）、カルセクエストリン、および関連する内腔側パートナー分子を足場として配置することで機能する。このカルシウム放出複合体を介して、トリアジンはSR内Ca²⁺の貯蔵量と放出動態の制御に寄与し、膜脱分極をCa²⁺依存的な収縮および下流のカルシウム応答性シグナル伝達プログラムへと結び付ける。TRDN機能の変化はCa²⁺恒常性を乱し、リアノジン受容体チャネルの挙動を不安定化させ、不整脈誘発性およびミオパチー性の機序に関連する筋・心臓表現型と関連する。そのためTrdnは、心筋細胞および骨格筋線維におけるSR接合部の構築、カルシウムハンドリング、ならびに興奮収縮連関の忠実性を制御する経路の研究で広く用いられている。

Triadin CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Trdnの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Triadin CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Trdn 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTrdn転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Triadinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTrdn遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTriadin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTrdn発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTriadin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。