TREML2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-435918-ACT

Treml2 codifica per il triggering receptor expressed on myeloid cells-like 2 (TREML2), un recettore di membrana di tipo I arricchito nelle cellule della linea mieloide e implicato nel riconoscimento dell’immunità innata e nella segnalazione infiammatoria. TREML2 è stato associato alla modulazione degli stati di attivazione di microglia e macrofagi, influenzando la produzione di citochine, le risposte fagocitiche e il cross-talk con l’immunità adattativa. Attraverso questi processi, Treml2 è spesso studiato nei circuiti che regolano la neuroinfiammazione e l’omeostasi delle cellule mieloidi residenti nei tessuti, con rilevanza per modelli di neurodegenerazione, infiammazione autoimmune e infezione. La sua localizzazione sulla superficie cellulare e l’espressione dipendente dal contesto lo rendono un nodo utile per analizzare la regolazione immunitaria mediata da recettori nei sistemi murini.

TREML2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Treml2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TREML2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Treml2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Treml2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TREML2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Treml2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TREML2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TREML2 nelle cellule tumorali con espressione di Treml2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.