Plasmide CRISPR d'Activation (h) TRAP150: sc-402921-ACT

Le gène humain THRAP3 code TRAP150, un facteur nucléaire de liaison à l’ARN associé à la transcription, qui couple le traitement du pré-ARNm à la régulation transcriptionnelle. TRAP150 participe à des complexes associés au spliceosome et module l’épissage alternatif ainsi que la maturation de l’ARNm, soutenant des programmes coordonnés d’expression génique. Il a été associé au contrôle de la transcription en réponse aux dommages à l’ADN et à des processus de contrôle qualité de l’ARN, notamment le métabolisme de l’ARN lié au stress. La dérégulation des réseaux de traitement de l’ARN dépendants de THRAP3/TRAP150 a été impliquée dans des altérations du contrôle du cycle cellulaire et des états transcriptionnels oncogéniques dans des contextes pertinents pour le cancer.

TRAP150 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de THRAP3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TRAP150 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus THRAP3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription THRAP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TRAP150. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus THRAP3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TRAP150 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TRAP150 dans les cellules tumorales présentant une expression de THRAP3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.