TR2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403818-ACT

NR2C1 umano codifica TR2, un recettore nucleare orfano che funziona come fattore di trascrizione specifico per sequenza, regolando programmi di espressione genica legati al destino cellulare, al metabolismo e alla segnalazione endocrina. TR2 si lega agli elementi di risposta dei recettori nucleari e interagisce con coregolatori per modulare reti trascrizionali coinvolte nella differenziazione, nella biologia riproduttiva e nei processi di sviluppo. Nei pathway cellulari, l’attività di TR2 può influenzare lo stato della cromatina e l’omeostasi trascrizionale, orientando le decisioni di linea cellulare e l’espressione genica in risposta allo stress. Un’espressione o una segnalazione disregolata di NR2C1/TR2 è stata associata in letteratura a stati di differenziazione alterati e a programmi trascrizionali rilevanti per il cancro, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico negli studi di regolazione genica.

TR2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NR2C1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TR2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NR2C1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NR2C1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TR2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NR2C1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TR2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TR2 nelle cellule tumorali con espressione di NR2C1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.