TPMT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423483

Panoramica

Tpmt codifica la tiopurina S-metiltransferasi (TPMT), una metiltransferasi citosolica dipendente dalla S-adenosil-L-metionina che catalizza la S-metilazione delle tiopurine e di substrati correlati contenenti zolfo. Nelle cellule murine, l’attività di TPMT contribuisce al metabolismo degli xenobiotici e degli analoghi nucleotidici, modulando i pool intracellulari di nucleotidi della tioguanina e i conseguenti effetti sullo stress di replicazione del DNA e sulla segnalazione del danno. La variabilità della funzione di TPMT è ampiamente utilizzata come modello per studiare i determinanti della sensibilità alle tiopurine e i meccanismi di tossicità ematopoietica, senza implicare un’applicazione clinica. Tpmt è quindi rilevante per vie che collegano la biotrasformazione dei farmaci, l’equilibrio redox e l’integrità del genoma nei tessuti proliferativi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TPMT (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tpmt in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tpmt insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tpmt a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TPMT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tpmt per lo studio della segnalazione di TPMT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tpmt critici per la funzione di TPMT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tpmt per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TPMT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TPMT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tpmt. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TPMT Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TPMT (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tpmt per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tpmt definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.