Topo IIIβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423472

Panoramica

Top3b codifica la DNA topoisomerasi III beta (Topo IIIβ), una topoisomerasi di tipo IA che risolve lo stress topologico e gli intermedi della ricombinazione durante il mantenimento del genoma. Nelle cellule murine, Topo IIIβ è implicata nella preservazione dell’integrità degli acidi nucleici grazie a ruoli nella riparazione del DNA, nelle risposte allo stress associato alla replicazione e nella regolazione del metabolismo dell’RNA, in linea con la sua capacità di agire sia su substrati di DNA sia di RNA. Queste attività si intersecano con vie che controllano i conflitti tra trascrizione e replicazione e la stabilità del genoma guidata dalla ricombinazione, processi che influenzano l’omeostasi cellulare. L’alterazione della processazione degli acidi nucleici dipendente da Top3b è stata associata a fenotipi di instabilità genomica ed è rilevante per studi su meccanismi di neurosviluppo e oncogenesi in sistemi modello.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Topo IIIβ (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Top3b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Top3b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Top3b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Topo IIIβ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Top3b per lo studio della segnalazione di Topo IIIβ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Top3b critici per la funzione di Topo IIIβ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Top3b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Topo IIIβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Topo IIIβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Top3b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Topo IIIβ Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Topo IIIβ (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Top3b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Top3b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.