Tom70 Plasmide Double Nickase (h): sc-402022-NIC

TOMM70 codifica Tom70, un recettore di importazione della membrana mitocondriale esterna che riconosce preproteine citosoliche e carrier idrofobici legati a chaperoni, coordinandone la consegna al complesso TOM per la traslocazione nei mitocondri. Supportando la biogenesi dei componenti della catena respiratoria e la proteostasi mitocondriale, Tom70 contribuisce alla capacità di fosforilazione ossidativa, alla dinamica dell’organello e all’adattamento cellulare allo stress. Un’alterata funzione di TOMM70 è stata studiata in contesti di disfunzione mitocondriale e neurodegenerazione e può influenzare la segnalazione dell’immunità innata a livello mitocondriale modulando la disponibilità e l’organizzazione dei fattori importati che interagiscono con le vie antivirali dipendenti da MAVS. Queste caratteristiche rendono TOMM70 un bersaglio utile per indagare l’importazione proteica mitocondriale, il rimodellamento metabolico e i circuiti di risposta allo stress rilevanti per fenotipi di malattie complesse.

Tom70 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TOMM70 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TOMM70. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TOMM70. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TOMM70 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.