TOM40 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400967-ACT

Il gene umano **TOMM40** codifica **TOM40**, il poro centrale a β-barile della translocasi della membrana mitocondriale esterna (complesso **TOM**), che media l’importazione nei mitocondri di proteine codificate dal nucleo. Consentendo il riconoscimento dei precursori e la loro traslocazione attraverso la membrana esterna, TOM40 sostiene la proteostasi mitocondriale, la capacità di fosforilazione ossidativa e il coordinamento della biogenesi mitocondriale con il metabolismo cellulare. La funzione di TOMM40 interseca vie che regolano la dinamica mitocondriale, la segnalazione di stress e l’apoptosi, grazie al suo ruolo nel mantenere un traffico proteico efficiente verso l’organello. La variazione genetica e un’importazione mitocondriale deregolata sono state associate a neurodegenerazione e ad altri disturbi caratterizzati da disfunzione mitocondriale, rendendo TOMM40 un nodo chiave per studi meccanicistici dell’omeostasi mitocondriale.

TOM40 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TOMM40 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TOM40 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TOMM40 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TOMM40, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TOM40. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TOMM40 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TOM40 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TOM40 nelle cellule tumorali con espressione di TOMM40 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.