TNF-R1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400206-ACT

TNFRSF1A codifica per TNF‑R1, un recettore del TNF espresso in modo ubiquo che avvia la segnalazione in risposta al TNF per regolare l’infiammazione, la sopravvivenza cellulare e la morte cellulare. Il legame con il ligando promuove l’assemblaggio di complessi associati al recettore che modulano le vie di NF‑κB e MAPK per risposte trascrizionali e, a seconda del contesto cellulare, possono anche indirizzare la segnalazione verso l’attivazione delle caspasi e la necrosi regolata. Attraverso questi meccanismi, TNF‑R1 influenza le reti citochiniche, il reclutamento dei leucociti e l’omeostasi tissutale. Una segnalazione TNFRSF1A/TNF‑R1 deregolata è stata implicata in fenotipi autoinfiammatori e, più in generale, nella biologia delle malattie infiammatorie, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici sulla segnalazione immunitaria e sulle risposte allo stress.

TNF-R1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TNFRSF1A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TNF-R1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TNFRSF1A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TNFRSF1A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TNF-R1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TNFRSF1A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TNF-R1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TNF-R1 nelle cellule tumorali con espressione di TNFRSF1A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.