TMTC3 Plasmide Double Nickase (h): sc-409056-NIC

TMTC3 codifica una proteina transmembrana del reticolo endoplasmatico contenente ripetizioni tetratricopeptidiche, implicata nel controllo qualità delle proteine e nella maturazione delle glicoproteine, inclusa la regolazione della O-mannosilazione su specifici substrati. Attraverso il suo ruolo nella proteostasi del RE, TMTC3 influenza il ripiegamento, il traffico e la stabilità di proteine di membrana e secrete, intersecando vie quali la segnalazione dello stress del RE e la modulazione della risposta alle proteine non ripiegate (UPR). Studi genetici e funzionali hanno collegato l’alterazione di TMTC3 a fenotipi di neurosviluppo e a cambiamenti dell’omeostasi cellulare coerenti con un’alterata elaborazione delle proteine. Di conseguenza, TMTC3 viene spesso studiato in modelli di sviluppo neuronale, maturazione di recettori coinvolti in adesione e segnalazione, e vie associate al RE rilevanti per i meccanismi di malattie congenite e neurologiche.

TMTC3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TMTC3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TMTC3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TMTC3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TMTC3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.