TMEM65 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406584

Panoramica

TMEM65 codifica la proteina transmembrana 65, una proteina associata alle membrane mitocondriali implicata nel mantenimento dell’organizzazione della membrana mitocondriale interna e nel supporto della fosforilazione ossidativa. TMEM65 è stata collegata alla bioenergetica mitocondriale, alla regolazione del potenziale di membrana e alle risposte cellulari allo stress metabolico, influenzando così la produzione di ATP e l’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno. Un’alterazione della funzione di TMEM65 è stata associata a fenotipi di disfunzione mitocondriale ed è rilevante per gli studi sui tessuti ad alta richiesta energetica, in cui una respirazione compromessa può contribuire ai meccanismi di malattie neuromuscolari e cardiometaboliche. In quanto componente di una via mitocondriale, TMEM65 è utile per studiare la segnalazione mitocondriale, il controllo di qualità dell’organello e i programmi trascrizionali adattativi allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM65 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TMEM65 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TMEM65 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TMEM65 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TMEM65.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TMEM65 per lo studio della segnalazione di TMEM65, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TMEM65 critici per la funzione di TMEM65
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TMEM65 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TMEM65 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TMEM65 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TMEM65. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TMEM65 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TMEM65 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TMEM65 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TMEM65 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.