TMED2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402765-ACT

TMED2（transmembrane p24 trafficking protein 2）は、p24カーゴ受容体ファミリーに属するI型膜タンパク質で、小胞体（ER）とゴルジ体の間を循環しながら、小胞出芽、カーゴ選別、分泌経路の恒常性を調節します。COPI/COPII依存的な輸送および初期分泌経路の品質管理に関与することで、TMED2は複数の膜タンパク質や分泌タンパク質の成熟と細胞表面への輸送に影響を与えます。分泌輸送の変化やER–ゴルジ間輸送ダイナミクスの異常は、しばしばプロテオスタシスのストレス応答や細胞シグナル出力の変化と関連します。TMED2を含むp24ファミリー分子の機能不全は、異常分泌、受容体輸送、細胞ストレス経路が疾患関連表現型に寄与する腫瘍生物学などの病態と関連することが、文献上示されています。

TMED2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TMED2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TMED2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TMED2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTMED2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TMED2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTMED2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTMED2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTMED2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTMED2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。