Plasmide Double Nickase (h) TIS11B: sc-416672-NIC

ZFP36L1 humain (TIS11B) code une protéine de liaison à l’ARN se fixant aux éléments riches en AU, qui favorise la désadénylation et la dégradation des ARNm, modelant ainsi la stabilité des transcrits et leur traduction. Par ses interactions avec le complexe de désadénylation CCR4–NOT, TIS11B régule des programmes post-transcriptionnels liés à la signalisation immunitaire, à la différenciation hématopoïétique et au contrôle du cycle cellulaire. L’activité de ZFP36L1 s’intègre à des voies sensibles aux cytokines et à des réseaux de gènes de réponse immédiate afin de limiter les réponses inflammatoires et prolifératives. Une dérégulation du renouvellement des ARNm médié par ZFP36L1 a été associée à un développement lymphoïde anormal et à des états transcriptionnels oncogéniques, ce qui en fait un nœud utile pour étudier la dégradation de l’ARN dans des contextes pertinents pour la maladie.

TIS11B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ZFP36L1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ZFP36L1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ZFP36L1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ZFP36L1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.