Tim17B Plasmide Double Nickase (h): sc-411441-NIC

TIMM17B codifica Tim17B, un componente essenziale della traslocasi TIM23 nella membrana mitocondriale interna, che media l’importazione e l’inserimento nei mitocondri di proteine codificate dal nucleo. Sostenendo l’omeostasi delle proteine mitocondriali, Tim17B contribuisce alla capacità di fosforilazione ossidativa, al mantenimento del potenziale di membrana mitocondriale e alla proteostasi nella matrice e nella membrana interna. L’alterazione della funzione del complesso TIM23 può perturbare il metabolismo energetico e attivare vie di segnalazione dello stress mitocondriale, come la risposta mitocondriale alle proteine non correttamente ripiegate (mitochondrial unfolded protein response, UPRmt), collegando la biologia di TIMM17B a programmi più ampi di adattamento cellulare. In quanto fattore di importazione mitocondriale, TIMM17B è spesso oggetto di studi sul riprogrammamento bioenergetico e sulla disfunzione mitocondriale rilevanti per il metabolismo delle cellule tumorali e per fenotipi di stress mitocondriale associati alla neurodegenerazione.

Tim17B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TIMM17B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TIMM17B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TIMM17B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TIMM17B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.