Particules Lentivirales d'Activation (h) TIM-3: sc-416365-LAC

HAVCR2 code la protéine 3 contenant un domaine immunoglobuline et un domaine mucine des lymphocytes T (TIM‑3), un récepteur immunorégulateur exprimé sur les lymphocytes T activés et d’autres sous-populations immunitaires, qui contribue à ajuster la fonction effectrice, l’épuisement et la tolérance périphérique. La signalisation de TIM‑3 s’articule avec le contrôle par points de contrôle immunitaires et les circuits inflammatoires, influençant la production de cytokines, les réponses spécifiques d’antigène et l’équilibre entre activation et suppression immunitaires. Une activité déréglée de HAVCR2/TIM‑3 a été associée aux infections chroniques et au dysfonctionnement immunitaire lié aux tumeurs ; elle est également impliquée dans des contextes de maladies auto-immunes et inflammatoires via ses effets sur la différenciation des lymphocytes T et le dialogue avec les cellules myéloïdes. Ces propriétés font de HAVCR2 une cible pertinente pour disséquer les mécanismes d’évasion immunitaire, de rupture de la tolérance et de transitions d’état des cellules immunitaires.

Les particules d'activation lentivirales TIM-3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de HAVCR2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TIM-3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription HAVCR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TIM-3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif HAVCR2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.