TIF1α Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403838-LAC

TRIM24 (TIF1α) codifica un co-regolatore trascrizionale con attività di ligasi E3 dell’ubiquitina che integra segnali legati alla cromatina tramite un dominio RING C3HC4 e un modulo PHD-bromodominio, modulando così programmi di espressione genica. TIF1α partecipa alla segnalazione dei recettori nucleari e a un più ampio controllo epigenetico della trascrizione, influenzando processi quali la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e il rimodellamento della cromatina. Attraverso interazioni dipendenti dal contesto con fattori di trascrizione e marcatori istonici, TRIM24 può plasmare vie oncogeniche e associate alla differenziazione, rendendolo un nodo frequentemente studiato nella biologia del cancro e nella regolazione trascrizionale. Un’attività o un’espressione deregolata di TRIM24 è stata collegata ad alterazioni degli stati trascrizionali proliferativi e metabolici, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici delle reti di regolazione genica.

Le particelle di attivazione lentivirale TIF1α (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TRIM24 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TIF1α (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TRIM24, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TIF1α. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TRIM24 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.