TGF beta Receptor 2/TGFBR2 Plasmide Double Nickase (m): sc-423371-NIC

Il gene murino **Tgfbr2** codifica per il Recettore 2 del TGF beta (TGFBR2), una chinasi transmembrana serina/treonina che lega i ligandi TGFB e fosforila TGFBR1 per avviare la segnalazione canonica mediata da SMAD2/3. Questa via coordina, in modo dipendente dal contesto, il controllo della regolazione del ciclo cellulare, la differenziazione, la transizione epitelio–mesenchimale e il rimodellamento della matrice extracellulare, integrandosi inoltre con la segnalazione MAPK, PI3K–AKT e delle GTPasi RHO. Nella ricerca biomedica, l’alterazione dell’attività di TGFBR2 è ampiamente utilizzata per modellare la disregolazione dell’omeostasi tissutale, la modulazione immunitaria e il rimodellamento fibrotico, nonché il “rewiring” delle vie di segnalazione osservato nella biologia dei tumori e nei fenotipi dello sviluppo. Poiché TGFBR2 si colloca al vertice della trasduzione del segnale TGFB, perturbare **Tgfbr2** offre un modo diretto per analizzare i programmi trascrizionali a valle e i circuiti di feedback dipendenti dal ligando.

TGF beta Receptor 2/TGFBR2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tgfbr2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tgfbr2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tgfbr2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tgfbr2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.