TGFβ2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423367-ACT

Il gene murino **Tgfb2** codifica il transforming growth factor beta 2 (TGFβ2), una citochina secreta che segnala attraverso i recettori del TGFβ per attivare programmi trascrizionali dipendenti da SMAD2/3 e un più ampio crosstalk con le vie MAPK e PI3K. TGFβ2 regola lo sviluppo embrionale, la patterning tissutale, la deposizione della matrice extracellulare, la modulazione immunitaria e la transizione epitelio-mesenchimale, influenzando le decisioni sul destino cellulare e il rimodellamento dello stroma. Una segnalazione di TGFβ2 deregolata è stata implicata in processi fibrotici, angiogenesi anomala e interazioni tra tumore e microambiente che determinano invasività ed evasione immunitaria. Di conseguenza, Tgfb2 è ampiamente studiato per i suoi ruoli nella differenziazione, nella risposta alla lesione e nei percorsi di rimodellamento rilevanti per la malattia nei modelli murini.

TGFβ2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Tgfb2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TGFβ2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Tgfb2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Tgfb2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TGFβ2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Tgfb2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TGFβ2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TGFβ2 nelle cellule tumorali con espressione di Tgfb2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.