Plásmido CRISPR de Activación (h) TGF beta 1: sc-400067-ACT

TGFB1 codifica el factor de crecimiento transformante beta 1 (TGF‑β1), una citocina secretada pleiotrópica que se sintetiza como un complejo latente y se activa en el medio extracelular para regular decisiones sobre el destino celular. Mediante la señalización canónica de SMAD2/3 y el diálogo cruzado con las vías MAPK, PI3K/AKT y de las GTPasas Rho, TGF‑β1 controla la deposición de matriz extracelular, la transición epitelio‑mesénquima, la inmunosupresión y la remodelación tisular. La actividad desregulada de TGFB1 se asocia con fibrosis, inflamación crónica, reparación deficiente de heridas y señalización en el microambiente tumoral, lo que lo convierte en un nodo central para estudiar el control del crecimiento dependiente del contexto y las interacciones estroma‑inmunes. Sus amplios efectos paracrinos también respaldan investigaciones sobre programas de diferenciación y redes transcripcionales impulsadas por citocinas en diversos modelos celulares humanos.

TGF beta 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TGFB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TGF beta 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TGFB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TGFB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TGF beta 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TGFB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TGF beta 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TGF beta 1 en células tumorales con expresión de TGFB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.