TGFα CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401563-ACT

TGFAはトランスフォーミング増殖因子α（TGFα）をコードしており、TGFαは分泌型のEGFRリガンドとして受容体チロシンキナーゼシグナルを活性化し、上皮細胞の増殖・生存・遊走を制御します。EGFRが刺激されると、TGFαは下流のRAS–RAF–MEK–ERK経路およびPI3K–AKT経路の活性を促進し、細胞周期の進行や分化プログラムに影響を与えます。TGFA/EGFRシグナルの破綻は、異常な増殖制御や組織リモデリングの文脈でしばしば研究され、がん化シグナルネットワークや炎症性微小環境とも関連します。オートクライン／パラクライン因子として、TGFαはヒト細胞モデルにおいて、リガンド依存的な受容体活性化、フィードバック制御、ならびに経路間クロストークを解析するためによく用いられます。

TGFα CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TGFAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TGFα CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TGFA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTGFA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TGFαの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTGFA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTGFα依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTGFA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTGFα経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。