TFIIIC110 Plasmide Double Nickase (h): sc-404261-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TFIIIC110 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TFIIIC110 Double Nickase Plasmid (h) e il TFIIIC110 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GTF3C2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TFIIIC110 Antibody (2395C2a): sc-81406
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TFIIIC110 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404261-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TFIIIC110 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404261-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GTF3C2 codifica TFIIIC110, una subunità centrale del complesso TFIIIC che riconosce elementi di promotore interni nei geni trascritti dalla RNA polimerasi III, inclusi i tRNA e altri piccoli RNA non codificanti. Favorendo il reclutamento di TFIIIB e l’assemblaggio del complesso di pre-inizio della Pol III, TFIIIC110 contribuisce a programmi trascrizionali basali che collegano il metabolismo dell’RNA alla crescita cellulare e alle risposte allo stress. TFIIIC interagisce anche con l’organizzazione della cromatina e l’architettura nucleare, mettendo in relazione i loci della Pol III con caratteristiche più ampie della regolazione del genoma. La deregolazione del controllo trascrizionale della Pol III e delle subunità di TFIIIC è stata associata a stati proliferativi e ad alterazioni dell’omeostasi dei piccoli RNA, rendendo GTF3C2 un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla trascrizione e sulla regolazione del genoma.
TFIIIC110 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GTF3C2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GTF3C2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GTF3C2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GTF3C2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.