TEM5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407178

Panoramica

ADGRA2 (TEM5) codifica un recettore di adesione accoppiato a proteine G (GPCR) con una grande regione extracellulare che supporta le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice e collega gli stimoli extracellulari alla segnalazione intracellulare. In quanto membro della famiglia dei GPCR di adesione, TEM5 è associato a processi quali il comportamento delle cellule endoteliali, il rimodellamento vascolare e tissutale e la regolazione dell’organizzazione del citoscheletro attraverso vie di segnalazione dipendenti dai GPCR. L’espressione di TEM5 è stata riportata in contesti rilevanti per la vascolarizzazione associata ai tumori e per il rimodellamento dello stroma, rendendolo di interesse per studi sulla segnalazione angiogenica e sulla regolazione del microambiente. L’analisi della funzione di ADGRA2 può contribuire a chiarire come la segnalazione dei GPCR di adesione integri le dinamiche di adesione extracellulare con risposte trascrizionali e citoscheletriche nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TEM5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ADGRA2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ADGRA2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ADGRA2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TEM5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ADGRA2 per lo studio della segnalazione di TEM5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ADGRA2 critici per la funzione di TEM5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ADGRA2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TEM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TEM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ADGRA2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TEM5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TEM5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ADGRA2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ADGRA2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.