TEF-5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403417-ACT

O TEAD3 humano codifica o fator de transcrição TEF-5, uma proteína de ligação ao DNA com domínio TEA/ATTS que atua em parceria com os coativadores YAP/TAZ para regular programas gênicos que controlam a proliferação, a especificação de linhagem e o crescimento tecidual. O TEF-5 funciona na rede de sinalização Hippo, integrando sinais mecânicos e o contato célula–célula para modular resultados transcricionais, como a remodelação da matriz extracelular e a progressão do ciclo celular. A atividade transcricional desregulada do eixo TEAD–YAP/TAZ tem sido associada a fenótipos oncogênicos, vias relacionadas à fibrose e programas de desenvolvimento alterados, tornando o TEAD3 um alvo útil para estudos mecanísticos do controle transcricional. Assim, a expressão e a atividade de TEAD3 são relevantes para dissecar a regulação gênica dependente do contexto em biologia do câncer, desenvolvimento de órgãos e transições de estado celular.

TEF-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TEAD3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TEF-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TEAD3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TEAD3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TEF-5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TEAD3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TEF-5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TEF-5 em células tumorais com expressão de TEAD3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.