TAZ CRISPR Activation Plasmid (m): sc-430168-ACT

Das murine Gen **Wwtr1** kodiert den transkriptionellen Koaktivator **TAZ (WWTR1)**, einen zentralen Effektor des Hippo-Signalwegs, der mechanische Reize und Zellpolarität mit Genexpressionsprogrammen verknüpft, die Proliferation, Überleben und Linienfestlegung steuern. TAZ pendelt als Antwort auf eine durch **LATS1/2** vermittelte Phosphorylierung zwischen Zytoplasma und Zellkern und integriert Signale aus **GPCR**, **WNT/β‑Catenin** sowie zytoskelettaler Spannung, um die **TEAD**-abhängige Transkription zu modulieren. In Entwicklung und Gewebehomöostase trägt **Wwtr1** zur Kontrolle der Organgröße, zur Regeneration und zum Verhalten von Stamm-/Vorläuferzellen bei, während eine fehlregulierte TAZ-Aktivität in experimentellen Modellen mit aberrantem Wachstum, fibroseassoziierten Transkriptionsprogrammen und onkogenen Phänotypen in Verbindung steht. Diese Funktionen machen **Wwtr1/TAZ** zu einem häufigen Ziel bei Untersuchungen der Mechanotransduktion, der epithelial–mesenchymalen Plastizität und kontextspezifischer transkriptioneller Netzwerke.

TAZ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Wwtr1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TAZ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Wwtr1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Wwtr1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TAZ-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Wwtr1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TAZ-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TAZ-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Wwtr1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.