TAUT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402918

Panoramica

SLC6A6 codifica il trasportatore della taurina TAUT, un trasportatore di membrana dipendente da sodio e cloruro che mantiene i pool intracellulari di taurina necessari per l’omeostasi osmotica, la gestione del calcio e la citoprotezione contro lo stress ossidativo e dello stress del reticolo endoplasmatico (ER). L’assorbimento di taurina mediato da TAUT supporta la funzione mitocondriale, la stabilizzazione delle membrane e processi di segnalazione che influenzano la sopravvivenza cellulare, la differenziazione e la regolazione del volume in tessuti eccitabili e non eccitabili. Alterazioni dell’attività di SLC6A6 e della disponibilità di taurina sono state associate a una maggiore suscettibilità allo stress cellulare e a disfunzioni in sistemi quali retina, cuore, rene e tessuto nervoso, rendendolo rilevante per studi di neurobiologia, regolazione cardiometabolica e risposte infiammatorie allo stress. Come parte delle reti di trasporto dei carrier di soluti, TAUT interseca vie che regolano i gradienti ionici, l’equilibrio redox e programmi genici di adattamento allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TAUT (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC6A6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC6A6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC6A6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TAUT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC6A6 per lo studio della segnalazione di TAUT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC6A6 critici per la funzione di TAUT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC6A6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TAUT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TAUT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC6A6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TAUT Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TAUT (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC6A6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC6A6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.